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La lentille optotune ne doit pas être placée à 4 cm avant le back aperture de l'objectif. En effet, en changeant la focale de la lentille, on perd l'illumination de Kohler, car le focus n'est plus fait sur le back aperture.
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La lentille doit donc être placée directement au back aperture de l'objectif. Doit-on aussi mettre une lentille divergente à cet endroit afin de s'assurer de respecter le NA à l'entrée de l'objectif, minimiser les aberrations, s'assurer de remplir le back aperture? Est-ce possible avec le microscope BX51 (l'adaptateur de l'objectif est de 4 cm en ce moment) ou on doit l'imprimer en 3D (ou en trouver un)?
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Comme le FoV change lorsque la focale de la lentille optotune est modifiée, on doit s'assurer que la caméra capte toujours le plan focal à l'échantillon. Peut-on simplement faire en sorte de remplir la caméra avec le plus petit FoV possible? Ainsi, on regarde toujours la même région d'intérêt.
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Serait-ce plus simple d'utiliser un relais (système 4f 1:1) AVANT la lentille Excelitas (au début de l'illuminateur) afin de rapporter l'image de la lentille optotune au back aperture. Un relais (1:1) devra aussi être utilisé entre le diffuseur et la lentille optotune dans ce cas-ci. Et tant qu'à utiliser un système 4f entre la lentille et l'Excelitas... pourquoi pas faire un système 4f qui grossit la lentille optotune afin de remplir le back aperture (On pourrait utiliser la EL-10-30 dans ce cas-ci, sans avoir besoin de la EL-16-40-TC-VIS).
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On doit s'assurer de toujours capter le plan focal illuminé à l'échantillon à la caméra. S'il y a une optotune sur le retour de l'illumination de l'échantillon (optotune entre objectif et tube lens), est-ce que la caméra va capter le plan focal déterminé par la focale de la lentille optotune? AUSSI, si la lentille optotune est plutôt utilisée dans un relais et qu'elle n'est donc pas positionnée sur le retour de l'illumination, est-ce que la caméra va capter le plan focal déterminé par la focale de la lentille optotune? EN FAIT, est-ce que tout cela est vraiment important compte tenu du fait que l'on fait un traitement HiLo? Les speckles vont-t-il simplement permettrent de trouver l'image du plan focal?